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    英國(guó)OXOID藥敏紙片使用操作流程

    發(fā)布時(shí)間: 2020-08-20  點(diǎn)擊次數(shù): 2655次

    Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)紙片操作流程

     

    操作流程:

    提供的材料:Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)紙片。

    需要但沒有提供的材料:用適當(dāng)培養(yǎng)基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養(yǎng)基、無菌接種環(huán)和拭子、無菌鑷子、麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液、培養(yǎng)箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質(zhì)控菌種、測(cè)量抑菌環(huán)大小的裝置和當(dāng)?shù)貥?biāo)準(zhǔn)方法的判讀標(biāo)準(zhǔn)。

    方法:Oxoid藥敏紙片可能會(huì)與各種標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法一起使用,包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST,請(qǐng)參見現(xiàn)行的當(dāng)?shù)刂改?,查找特定信息,如推薦的培養(yǎng)基、接種物濃度水平和培養(yǎng)條件等。

    質(zhì)控程序:建議以適當(dāng)?shù)拈g隔檢測(cè)質(zhì)控菌株,可以在每次做試驗(yàn)時(shí)進(jìn)行,也可以根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)機(jī)構(gòu)提供的抗生素敏感性檢測(cè)指南推薦的程序。如果質(zhì)控微生物對(duì)特定抗生素的檢查結(jié)果在規(guī)定的范圍以外,不得報(bào)告患者的檢查結(jié)果,并不得使用該藥敏紙片,直至確定了產(chǎn)生這種不一致結(jié)果的原因(例如培養(yǎng)基、灌裝量、接種物、培養(yǎng)條件、質(zhì)控菌株或者藥敏紙片儲(chǔ)存或使用不正確)。

    限制:本產(chǎn)品供體外診斷使用,僅用于指示供試微生物的體內(nèi)敏感性。選擇何種抗微生物藥物進(jìn)行測(cè)試和報(bào)告必須由每個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室來決定。臨床醫(yī)生負(fù)責(zé)決定使用何種抗生素對(duì)抗供試微生物,同時(shí)應(yīng)考慮可能影響藥物體內(nèi)活性的其它因素。

    臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)方法小結(jié)(其它標(biāo)準(zhǔn)有所不同):培養(yǎng)基:Mueller-Hinton瓊脂用于檢測(cè)非苛養(yǎng)微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測(cè)腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌,GC瓊脂加1%規(guī)定的生長(zhǎng)添加劑用于檢測(cè)淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基用于檢測(cè)流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養(yǎng)菌或很少檢測(cè)的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基和檢測(cè)條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細(xì)菌前不應(yīng)太潮濕。

    供試微生物:采取適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法來核實(shí)供試微生物的推測(cè)鑒定結(jié)果。采用直接菌落法或生長(zhǎng)法制備標(biāo)準(zhǔn)化的接種物并在制備好的15分鐘內(nèi)接種到平板上:生長(zhǎng)法-用接種環(huán)蘸取3至5個(gè)形態(tài)上相似的菌落,并將其轉(zhuǎn)移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或

    類似培養(yǎng)基中。在35℃下培養(yǎng)2-6小時(shí)。用無菌鹽水或肉湯調(diào)整濁度,使?jié)岫鹊扔?.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)(制備0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液:將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl2 ·2H2O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中-將這一標(biāo)準(zhǔn)液置于暗處)。直接菌落法(葡萄球菌和鏈球菌的方法)-從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落,加入無菌鹽水或肉湯中,并制成等于0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。

    接種:將無菌拭子浸入菌懸液中,對(duì)著試管壁旋轉(zhuǎn)按壓,擠出多余的液體。沿著至少三個(gè)方向涂布平板表面。應(yīng)在接種的15分鐘內(nèi)將藥敏紙片放到平板上。

    藥敏紙片:使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗(yàn)藥敏紙片數(shù)量如下:

    微生物:

    每塊平板推薦的藥敏紙片:

    淋病奈瑟氏菌,副流感嗜血桿菌,流感嗜血桿菌和鏈球菌

    140-150 mm的平板上要9張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要4張藥敏紙片

    腦膜炎奈瑟氏菌

    140-150 mm的平板上要5張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要2張藥敏紙片

    非苛養(yǎng)菌

    140-150 mm的平板上要12張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要5張藥敏紙片

    在貼上藥敏紙片的15分鐘內(nèi)翻轉(zhuǎn)平板,并按照下面的規(guī)定培養(yǎng)

    微生物:

    培養(yǎng)要求:

    流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌

    5% CO2,35±2℃16-18小時(shí)

    淋病奈瑟氏菌

    5% CO2,36±1℃,20-24小時(shí)

    腦膜炎奈瑟氏菌

    5% CO2,35±2℃,20-24小時(shí)

    非苛養(yǎng)菌*

    需氧,35±2℃16-18小時(shí)

    鏈球菌

    5% CO2,35±2℃20-24小時(shí)

    *葡萄球菌和腸球菌需要培養(yǎng)24小時(shí)。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過35℃的條件下檢測(cè)不出來。

    判讀:培養(yǎng)后,測(cè)量細(xì)菌生長(zhǎng)*抑制區(qū)域的直徑,到mm。抑菌環(huán)的邊緣應(yīng)為肉眼可以發(fā)現(xiàn)的無明顯微生物生長(zhǎng)的區(qū)域。血平板的結(jié)果利用反射光從平板的上表面讀?。ú挥米x取溶血環(huán)的邊緣,而是細(xì)菌生長(zhǎng)的邊緣)。所有其它培養(yǎng)基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀(葡萄球菌和腸球菌除外,它們采用投射光讀取-有微弱的生長(zhǎng)表明有耐藥性)。如果是變形桿菌,忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長(zhǎng)的一層薄薄菌膜。對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀的完整說明可依照CLSI方法,請(qǐng)參考現(xiàn)行的CLSI M100標(biāo)準(zhǔn)。下表只詳細(xì)說明了在CLSI標(biāo)準(zhǔn)中的那些藥物/濃度。與其它標(biāo)準(zhǔn)方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得,但沒有在本說明書中詳細(xì)列出。

    *部分摘自CLSI文件M100-S20(M02-A10):“藥敏紙片擴(kuò)散法補(bǔ)充表”抗微生物藥物敏感性試驗(yàn)性能標(biāo)準(zhǔn)。可從臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807)獲得完整的標(biāo)準(zhǔn)。

     

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