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品名：Himedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基

英文：Vitamin B12 Assay Medium

貨號(hào)：M036

品牌：HiMedia

用途：維生素B12的微生物法測(cè)定

原理　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

乳酸桿菌生長(zhǎng)需要特別的營(yíng)養(yǎng)，因而在非選擇性培養(yǎng)基上很難生長(zhǎng)。維生素測(cè)定用培養(yǎng)基用于維生素的微生物法測(cè)定。該方法需要三種培養(yǎng)基：即維持培養(yǎng)基，用于保持菌種活力；接種培養(yǎng)基，用于測(cè)試菌液的制備；測(cè)定用培養(yǎng)基，用于待測(cè)維生素的定量。

HiMedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基，不含維生素B12，但包含所有其他維生素和必要養(yǎng)分，用于萊士曼乳酸桿菌（ATCC 7830）的生長(zhǎng)。萊士曼乳酸桿菌（ATCC7830）作為測(cè)定用菌，最早由Capp等人描述（1）并被美國藥典和美國分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）所推薦（2，3）。

用已知稀釋度的維生素B12標(biāo)準(zhǔn)品，可以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線（2，3）。

測(cè)試菌液的制備是將將活化后的菌株接種到乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基中，推薦在37°C 孵育24 小時(shí)，再離心、清洗、重懸于10 ml 生理鹽水中，再通過濁度分析或酸度分析，確定生長(zhǎng)反應(yīng)。用維生素B12的濃度及對(duì)應(yīng)的吸光度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。用標(biāo)準(zhǔn)曲線可確定待測(cè)樣本中的維生素B12的濃度。

應(yīng)非常小心地避免培養(yǎng)基和玻璃器具的污染。應(yīng)使用潔凈的無去污劑的玻璃器具。少量的外源物質(zhì)的污染可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。用于接種的測(cè)定菌應(yīng)在專用的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

應(yīng)用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　　 　　　 　

HiMedia維生素B12測(cè)定培養(yǎng)基推薦采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC 7830）作為測(cè)定用菌，進(jìn)行維生素B12的微生物法測(cè)定。

質(zhì)量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　  　

?   外觀——奶油色至黃色，具均勻性，傾向形成可容易分解成粉末狀的軟塊

?   制備好的培養(yǎng)基顏色和透明度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀

?   配比濃度——在25°C下8.5%w/v(8.5g/100ml水）水溶液，pH值為6.1±0.2

?   pH值——5.90-6.30

配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

稱取8.45g干粉培養(yǎng)基溶于100ml蒸餾水，必要時(shí)加熱使培養(yǎng)基溶解?；靹颍馆p微的沉淀均勻分布。測(cè)定時(shí)，分裝試管，每管為5ml培養(yǎng)基（包含標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品）。加蒸餾水，使總體積達(dá)到10ml。高壓消毒15磅121°C 5分鐘。立即冷卻培養(yǎng)基。每個(gè)試管(10 ml)的維生素B12水平為0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 ng時(shí)，均可獲得滿意結(jié)果。

培養(yǎng)反應(yīng)　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

進(jìn)行微生物法測(cè)定維生素B12。采用萊士曼氏乳酸桿菌（ATCC7830），35-37°C孵育18-24小時(shí)。

生長(zhǎng)狀況　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

隨著測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)品水平升高，（美國藥典維生素B12標(biāo)準(zhǔn)水平，0，0.025，0.050，0.075，0.1，0.125，0.150，0.2ng)，目標(biāo)菌生長(zhǎng)逐漸遞增，伴隨著620nm處吸光度的增加。